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浅析Bio-Rad电泳系统之垂直电泳仪的操作流程

发布时间: 2013-01-21  点击次数: 2778次
  浅析Bio-Rad电泳系统之垂直电泳仪的操作流程,具体内容如下:
  1、灌胶:把制胶器放在平稳的台面上。保持制胶器干燥,抬起两侧的羽状开关放开卡门,平放,放进橡胶垫圈并紧扣。先把厚玻璃平板放入,再放两侧的垫片,后放入带凹型的玻璃平板。紧紧合上卡门,同时按压两侧的羽状开关听到“咔嚓”声音。
  2、倒分离胶:将配好的分离胶溶液用加样枪缓慢加入制胶玻板之间,直至液面达到卡门边框下缘线处。小心用加样枪将去离子水沿水平方向沿水平方向沿水平方向沿水平方向加入制胶板中的分离胶液面上,以防止胶液蒸发并保证胶面平整。聚合大约需要30秒。
  3、倒浓缩胶:分离胶聚合后,倒掉去离子水,用滤纸吸去残液。在玻板中加满浓缩胶溶液,轻轻地插入合适的梳子,梳子的厚面向实验者,避免产生气泡。30分钟后,除去梳子,抬起两侧的羽状开关放开卡门,拿出带胶的制胶玻板。
  4、安装电泳槽:按压电泳槽中央夹具的开关使卡门松开,将玻璃夹板放入槽内。注意,两玻璃夹板的凹玻板均应与电泳槽内芯接触。如果每次只电泳一块胶,另一套玻璃夹板必须用提供的有机玻璃板代替。
  5、样品处理:在等待浓缩胶聚合时,可对样品进行处理,在样品中按1:1体积比加入上样缓冲器,在100℃加热3-5分钟以使蛋白质变性。
  6、加样:在外水槽加电泳缓冲液至槽体的一半位置。放正槽体,继续加注缓冲液,避免产生气泡,使内槽的水位均超过凹形板的缺口但低于方形板的上沿。用微量加样器或普通加样枪在梳井内按预定顺序加样,加样量通常为10~25μl。
  7、Bio-Rad电泳系统的电泳:盖好上盖,在100—150V的电压下电1—2小时,一般浓缩胶电压80V20~30Min,分离胶120V80Min,到样品指示剂到达玻璃板的下缘,关掉电源。取下玻璃夹板。用刀片或薄板将胶板玻璃橇开,用单面剃刀片将分离胶切掉,将凝胶板的左上角切掉一小角以标记样品顺序。
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